Yeni izole edilen bacillus licheniformis KG9’dan β- galaktozidazın üretimi, kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Batman’da (Taşlıdere, Türkiye) kaplıca sularından izole edilen, Bacillus licheniformis KG9 yeni bir ekstrasellüler β-galaktozidazın üretimi için büyük bir potansiyele sahiptir. Kültür koşulları ve ortam optimizasyonu NB (Nutrienth broth) β- galaktozidaz enziminin üretimi için gerekli olduğunu ortaya çıkarmıştır. Termostabil ekstrasellüler bir enzim olan β-galaktozidaz amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz ile kısmen saflaştırılmıştır. Enzimin spesifik aktivitesi 1631 U/mg proteinden 19030.45 U/mg proteine yükseltilmiştir. Kısmi saflaştırılmış enzimin moleküler ağırlığının nondenatüre poliakrilamid jel elektroforezi ile 116 kDa’dan az olduğu tespit edilmiştir. Laktoz içeren ve içermeyen ortamlarda, çalkalama şişelerinde büyümenin daha sonraki aşamalarında (96 saat) enzim aktivitesinde önemli bir üretim seviyesi belirlenmiştir, bunlar sırasıyla (2.45 U/mg protein) ve (3.25 U/mg protein)’dir. Enzim için optimum pH ve sıcaklık 8.0 ile 55 °C’dir. Kullanılan çeşitli karbon ve azot kaynakları arasında, karbon kaynaklarının enzim üretimini arttırmadığı ancak laktozun araştırılan diğer karbon kaynaklarından daha yüksek aktivite gösterdiği belirlenmiştir oysa, azot kaynaklarından glisin ve amonyum sülfat enzim üretimini hafif bir şekilde yükseltmiştir.

Bacillus licheniformis KG9 isolated from the waters of the hot spring (Taşlıdere, Turkey) in Batman, has a great potential for the production of a novel extracellular β- galactosidase. Optimization of culture conditions and media revealed that NB (Nutrienth broth) is essential for the production of β-galactosidase. An extracellular thermostable β-galactosidase has been partially purified by ammonium sulphate precipitation and dialysis. The specific activity of the enzyme was increased from 1631 U/mg protein to 19030.45 U/mg protein. The molecular mass of the partially purified enzyme as determined by non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis was an approximately less than 116 kDa. In the lactose-absence medium and lactose-presence medium, production of a significant level of enzyme activity was determined (2.45 U/mg protein) and (3.25 U/mg protein) next stages of growth (96h) in a shake flasks, respectively. The pH and temperature optima for the enzyme are 8.0 and 55°C. Among the various carbon and nitrogen sources used, carbon sources didn’t increase the enzyme production but lactose showed higher activity than the other investigated carbon sources, whereas the nitrogen sources glycine and ammonium sulphate slightly increased enzyme production.