DPPH* antioksidan analizinin yeniden değerlendirilmesi

Abstract

Antioksidanların uygulamaları, oksidatif stresin zararlı etkilerini en aza indirmedeki çeşitli rolleri nedeniyle artmaktadır. DPPH (1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil radikali; C18H12N5O6) antioksidan analizi, farklı bileşiklerin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan hızlı, basit ve ucuz bir yöntemdir. Ayrıntılı literatür taraması, çeşitli araştırma gruplarının farklı DPPH derişimlerinde (22,5–400µM), inkübasyon süresinde (5 dk-120 dk), reaksiyon çözücüsünde (etanol, metanol) ve reaksiyon karışım pH'sında (pH= 3 ve 5.5 tampon ortamı) olan oldukça farklı protokoller kullandıklarını göstermektedir. Farklı laboratuvarların sonuçlarının karşılaştırılması ve sonuçların doğrulanması için standart bir analizin gerekliliği çok önemlidir. Bu çalışmada DPPH antioksidan analizini etkileyen DPPH derişimi, standart madde derişimi, reaksiyon/inkübasyon süresi gibi önemli faktörler spektrofotometrik yöntem ile incelenerek standart bir DPPH antioksidan analiz yöntemi oluşturulmuştur. Bu yöntem kapsamında ölçümler, reaksiyon ortamındaki DPPH derişimi 25-75 µM aralığında, çalkalayıcılı inkübatörde 30oC’de, 30dk’da ve karanlık ortamda gerçekleştirilmelidir.

Applications of antioxidants are increasing due to their various roles in minimising harmful effects of oxidative stress. DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical) antioxidant assay is a fast, simple, inexpensive method commonly used to evaluate the antioxidant activity of different compounds. A detailed literature survey shows that various research groups have used widely different protocols differed in the concentration of DPPH (22,5–400µM), incubation time (5 min–120 min), reaction solvent (ethanol, methanol) and pH of the reaction mixture (pH=3 and 5.5 buffer) . The requirement of a standard assay is very important in order to compare the results of different laboratories and validation of the conclusions. In this study, a standard DPPH• antioxidant analysis procedure was performed by analyzing the important factors such as DPPH• concentration, standard substance concentration, reaction / incubation time by spectrophotometric method. Under this procedure, the measurements should be carried out at DPPH concentration in the reaction medium in the range of 25-75 µM, 30 ° C in a shaker incubator, 30 minutes and dark medium.